Структура 5-HT1A-рецептора
Серотониновый рецептор подтипа 5-HT₁A является белком (вернее гликопротеином), состоящим у человека из 422 аминокислот (молекулярная масса 46107 дальтон). Подобно другим трансмембранным метаботропным G-белок-связанным рецепторам, он имеет семь трансмембранных доменов и семь α-спиральных доменов, среди которых находится и активный сайт рецептора — место связывания с лигандами, такими, как серотонин. Обращённая к синапсу сторона имеет небольшой отрицательный электростатический заряд (что способствует электростатическому притяжению положительно заряженных лигандов), а обращённая внутрь клетки сторона имеет небольшой положительный электростатический заряд, способствующий связыванию с отрицательно заряженным сайтом Gi.
Гликозилируется по аспарагину в позициях 10, 11, 24 (Asn10, Asn11, Asn24). Связывается с убиквитином в позиции лизина 334 (Lys334).
Первичная, вторичная и третичная структуры белка 5-HT₁A-рецептора проявляют высокую степень аминокислотно-последовательностной и структурной гомологичности с первичной, вторичной и третичной структурами других G-белок-связанных рецепторных белков, в частности родопсина и особенно β₂-адренорецептора. Именно на базе аминокислотной и структурной гомологичности с родопсином были построены первые пространственные модели 5-HT₁A-рецептора. Позднее эти пространственные модели были усовершенствованы с использованием в качестве гомологичной модели β₂-адренорецептора, проявляющего более высокую степень аминокислотно-последовательностной, структурной и функциональной гомологичности с 5-HT₁A-рецептором.[1]
Белок 5-HT₁A-рецептора взаимодействует с липидами мембраны клетки, в частности холестерином и сфинголипидами,[2] приобретая при взаимодействии с холестерином более плотную пространственную конфигурацию и большее сродство к агонистам.[1]
Белок рецептора 5-HT₁A подвергается и другим посттрансляционным модификациям, а именно — пальмитированию (ковалентному соединению тиоэфирной связью с остатками пальмитиновой кислоты) в специфических, эволюционно высоко консервативных участках аминокислотной последовательности (что подтверждает важность этого пальмитирования для функционирования 5-HT₁A-рецептора) — в области остатков цистеина в позициях 417 и 420, находящихся в проксимальном С-терминальном домене рецептора. Показано, что отсутствие пальмитирования в любом из двух участков — 417 или 420 — значительно понижает функциональную активность 5-HT₁A-рецептора, а именно его способность связываться с гетеротримерным G-белком Gi и угнетать активность аденилатциклазы. При отсутствии пальмитирования одновременно в обоих цистеинах — 417 и 420 — способность 5-HT₁A-рецептора связываться с α-субъединицей Gi —белком Giα полностью утрачивается. При отсутствии пальмитирования одновременно в обоих цистеинах 417 и 420 также полностью утрачивается и функциональная активность 5-HT₁A-рецептора, в частности его способность угнетать стимулированное форсколином повышение аденилатциклазной активности и накопление циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) в клетке. Это даёт основания полагать, что пальмитирование цистеиновых остатков в позициях 417 и 420 критически необходимо для обеспечения функциональной активности 5-HT₁A-рецептора и его способности связываться с Gi и оказывать влияние на активность аденилатциклазного нисходящего эффекторного пути. Кроме того, зависящая от активации 5-HT₁A-рецептора активация ERK-сигнального пути также оказалась нарушенной у мутантного белка, лишённого способности к пальмитированию в цистеиновых остатках 417 и 420. Это заставляет предполагать, что пальмитирование белка 5-HT₁A-рецептора в цистеиновых остатках 417 и 420 важно также для обеспечения его способности к передаче сигнала через βγ-субъединицы G-белка (димер Giβγ) и ERK-сигнальный путь, в дополнение к важности этого пальмитирования для обеспечения способности к передаче сигнала через Giα и аденилатциклазный путь.[3]
Также было показано, что пальмитирование белка 5-HT₁A-рецептора в области цистеиновых остатков 417 и 420 необходимо для его правильного позиционирования в специфических местах клеточной мембраны, обогащённых холестерином и сфинголипидами — так называемых липидных рафтах. Показано также, что правильное позиционирование 5-HT₁A-рецептора именно в этих специфических местах клеточной мембраны, а не в произвольных её местах (и, соответственно, необходимое для этого пальмитирование цистеиновых остатков 417 и 420) важно для правильного функционирования 5-HT₁A-рецептора и эффективной передачи им сигнала внутрь клетки.[4]
Два идущих подряд остатка лейцина в позициях 414 и 415 C-терминального конца 5-HT₁A-рецептора критически важны для правильного трёхмерного пространственного фолдинга этого гликопротеина, для распознавания им агонистов и для правильного размещения 5-HT₁A-рецептора на поверхности тела нейрона и на его дендритах (в то время как 5-HT₁B-рецепторы преимущественно находятся на аксонах). Двухточечная мутация с заменой 414 и 415 лейцинов на соответствующие остатки аланина приводит к образованию нефункционального белка, который секвестрируется в эндоплазматическом ретикулуме клетки (то есть не транспортируется к клеточной мембране и не встраивается в неё), не способен распознавать агонисты и имеет резко пониженную степень гликозилирования. В то же время замена пальмитированных цистеинов 417 и 420 на серины приводит к меньшим нарушениям функциональности 5-HT₁A-рецептора.[5]
Белок 5-HT₁A-рецептора в культуре клеток по-разному гликозилируется в разных типах клеток, что влияет на возможность распознавания его теми или иными антителами при иммуногистохимическом исследовании тканей.[6]
Эволюционно высоко консервативный остаток треонина в 149-й позиции C-терминального конца (внутриклеточная петля i2), являющийся также известным местом фосфорилирования 5-HT₁A-рецептора протеинкиназой C играет роль в правильной передаче опосредованного G-белком Gi сигнала. В частности, мутантный белок 5-HT₁A-рецептора с заменой треонина в 149-й позиции на аланин (T149A) проявляет резко пониженную способность регулировать уровень внутриклеточного кальция — эффект, опосредуемый βγ-субъединицами G-белка, а также несколько пониженную способность угнетать активность аденилатциклазы и снижать внутриклеточное накопление цАМФ — эффект, опосредуемый α-субъединицей G-белка. Это позволяет предположить, что именно этот участок рецептора ответствен за специфическое взаимодействие с G-белком.[7]
Специфические аминокислотные остатки в трансмембранных доменах 4 и 5 (TM4/TM5) — остаток триптофана в 175-й позиции (Trp175 (4.64)), остаток тирозина в 198-й позиции (Tyr198 (5.41)), идущие подряд два остатка аргинина в 151-й и 152-й позиции (Arg151 (4.40) и Arg152 (4.41)) являются специфическим интерфейсом для димеризации 5-HT₁A-рецептора.[8]
Гетеродимеризация 5-HT1A-рецептора
Рецепторы подтипа 5-HT₁A формируют G-белок-связанные гетеродимеры со следующими рецепторами: 5-HT₇-рецептор,[9] 5-HT₁B, 5-HT₁D, ГАМКB₂, GPCR26, LPA₁, LPA₃, S1P₁, S1P₃.[10]
Примечания
- Paila YD1, Tiwari S, Sengupta D, Chattopadhyay A. Molecular modeling of the human serotonin1Areceptor: role of membrane cholesterol in ligand binding of the receptor (english) // Molecular BioSystems. — 2011. — Т. 7, вып. 7(1), № 1. — С. 224-234. — doi:10.1039/C0MB00148A. — PMID 20967314.
- Md. Jafurulla, A. Chattopadhyay. Membrane Lipids in the Function of Serotonin and Adrenergic Receptors (english) // Current Medicinal Chemistry. — 2013. — Т. 20, вып. 20(1), № 1. — С. 47-55. — ISSN 0929-8673. — doi:10.2174/0929867311302010006. — PMID 23151002.
- Ekaterina Papoucheva, Aline Dumuis, Michèle Sebben, Diethelm W. Richter, Evgeni G. Ponimaskin. The 5-Hydroxytryptamine(1A) Receptor Is Stably Palmitoylated, and Acylation Is Critical for Communication of Receptor with Gi Protein (english) // The Journal of Biological Chemistry. — 30 Jan 2004. — Т. 279, вып. 279(5), № 5. — doi:10.1074/jbc.M308177200. — PMID 14604995.
- Ute Renner, Konstantin Glebov, Thorsten Lang, Ekaterina Papusheva, Saju Balakrishnan, Bernhard Keller, Diethelm W. Richter, Reinhard Jahn, Evgeni Ponimaskin. Localization of the Mouse 5-Hydroxytryptamine1A Receptor in Lipid Microdomains Depends on Its Palmitoylation and Is Involved in Receptor-Mediated Signaling (english) // Molecular Pharmacology. — May 31, 2007. — Т. 72, вып. 72(3), № 3. — С. 502-513. — doi:10.1124/mol.107.037085. — PMID 17540717.
- Damien Carrel, Michel Hamon, Michèle Darmon. Role of the C-terminal di-leucine motif of 5-HT1A and 5-HT1B serotonin receptors in plasma membrane targeting (english) // Journal of Cell Science. — September 26, 2006. — Т. 119, вып. 119(20), № 20. — С. 4276-4284. — PMID 17003106.
- Anthony TE, Azmitia EC. Molecular characterization of antipeptide antibodies against the 5-HT1A receptor: evidence for state-dependent antibody binding. (english) // Molecular Brain Research. — 15 Oct 1997. — Т. 50, вып. 50(1-2), № 1-2. — С. 277-284. — PMID 9406944.
- Paola M. C. Lembo, Mohammad H. Ghahremani, Stephen J. Morris, Paul R. Albert. A Conserved Threonine Residue in the Second Intracellular Loop of the 5-Hydroxytryptamine 1A Receptor Directs Signaling Specificity (english) // Molecular Pharmacology. — July 1, 1997. — Т. 52, вып. 52(1), № 1. — С. 164-171. — PMID 9224826.
- Nataliya Gorinski, Noga Kowalsman, Ute Renner, Alexander Wirth, Michael T. Reinartz, Roland Seifert, Andre Zeug, Evgeni Ponimaskin, Masha Y. Niv. Computational and Experimental Analysis of the Transmembrane Domain 4/5 Dimerization Interface of the Serotonin 5-HT1A Receptor (english) // Molecular Pharmacology. — June 5, 2012. — Т. 82, вып. 82(3), № 3. — С. 448-463. — doi:10.1124/mol.112.079137. — PMID 22669805.
- Ute Renner, Andre Zeug, Andrew Woehler, Marcus Niebert, Alexander Dityatev, Galina Dityateva, Nataliya Gorinski, Daria Guseva, Dalia Abdel-Galil, Matthias Fröhlich, Frank Döring, Erhard Wischmeyer, Diethelm W. Richter, Erwin Neher, Evgeni G. Ponimaskin. Heterodimerization of serotonin receptors 5-HT1A and 5-HT7 differentially regulates receptor signalling and trafficking (english) // Journal of Cell Science. — February 22, 2012. — Т. 125, вып. 125, № Pt(10). — С. 2486-2499. — doi:10.1242/jcs.101337. — PMID 22357950.
- Kamran Salim, Tim Fenton, Jamil Bacha, Hector Urien-Rodriguez, Tim Bonnert, Heather A. Skynner, Emma Watts, Julie Kerby, Anne Heald, Margaret Beer, George McAllister, Paul C. Guest. Oligomerization of G-protein-coupled Receptors Shown by Selective Co-immunoprecipitation (english) // The Journal of Biological Chemistry. — February 19, 2002. — Т. 277, вып. 277(18), № 18. — С. 15482-15485. — doi:10.1074/jbc.M201539200. — PMID 11854302.