Окрашивание по Романовскому — Гимзе

Окрашивание по Романовскому — Гимзе — цитологический метод окрашивания микроорганизмов, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для изучения методом световой микроскопии. Предложена в 1904[1] году Густавом Гимзой. В авторской версии название красителя — «Giemsasche Lösung für die Romanowsky Färbung» (Раствор Гимзы для окраски по Романовскому)[2]. Окрашивает ацидофильные образования в различные оттенки красного цвета, базофильные — в цвета от пурпурного до синего.

Приготовление красителя

Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчёта 1—2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20—25 минут при 37 °C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии.

Красящую смесь Романовского-Гимзы, которая имеет в основе краску Романовского-Райта, в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объёмов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.

Специальный стандартный раствор Гимза
  • Состав красителя:
Азур II — 3,772 г
Эозин — 2,165 г
Метиленовый синий — 1,563 г
Метанол (ЧДА) — 750,0 мл
Глицерин (ЧДА) — 256,0 мл

Методика окраски
  • Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером, но рН буфера зависит от вида мазка: для мазка костного мозга — 5,8—6,0, для мазка крови — 6,4—6,5, для выявления простейших — 6,8, малярийного плазмодия — 7,0—7,2.
  • Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии.

Результат окраски
Амастиготы Leishmania tropica, расположенные в макрофагах. Увеличение 10×100, окраска по Гимзе.

Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток — в голубой, ядра — в красный. При окрашивании простейших их цитоплазма приобретает голубой цвет, а ядра — красно-фиолетовый.


Результаты окрашивания мазков крови

  • цитоплазма лимфоцитов окрашивается в сине-голубой цвет, их ядра — в цвета от интенсивно пурпурного до фиолетового;
  • цитоплазма моноцитов окрашивается в мутный голубовато-серый цвет, их ядра — в более светлый пурпурно-красный, нежная азурофильная зернистость;
  • гранулы базофилов окрашиваются в интенсивный сине-фиолетовый цвет;
  • гранулы эозинофилов окрашиваются в оранжево-розовый цвет;
  • гранулы нейтрофилов окрашиваются в цвета от пурпурного до фиолетового;
  • ядра лейкоцитов фиолетово-красного цвета с хорошо видимой структурой хроматина; хорошо выделяются ядрышки;
  • грануломеры тромбоцитов окрашиваются в красный, гиаломеры — в голубой;
  • розовая окраска гемоглобина.

См. также

Примечания
  1. Giemsa G. Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Methylenazur-Methylenblau-Eosin-Färbemethode zur Erzielung der Romanowsky-Nochtschen Chromatinfärbung. (нем.) // Centralbl f Bakt etc : magazin. — 1904. — Bd. 37. — S. 308—311.
  2. Безруков А. В. Окраска по Романовскому: к вопросу о приоритете / К 120-й годовщине открытия эффекта Романовского. – 12 с. (недоступная ссылка)
This article is issued from Wikipedia. The text is licensed under Creative Commons - Attribution - Sharealike. Additional terms may apply for the media files.