GenBank

В марте 1979 года в Университете Рокфеллера в Нью-Йорке состоялась встреча тридцати молекулярных биологов и специалистов по компьютерным наукам. На ней была согласована позиция о необходимости создания общенациональной компьютеризованной базы данных. Это было обусловлено стремительными темпами роста количества известных последовательностей ДНК, а также перспективами получения новых биологических знаний путём их анализа и сравнения. До того времени существовало несколько отдельных коллекций последовательностей, но ни одна из них не была полной[2].Три года понадобилось Национальному Институту Здоровья (NIH), чтобы разработать схему финансирования проекта. За это время EMBL сделала общедоступной свою собственную базу данных последовательностей. Такая досадная для NIH задержка явилась следствием не только медленной работы бюрократической системы, но и неопределённостью среди учёных в отношении роли биологических коллекций во времена преобладания экспериментальных методов познания живого. Под давлением нескольких учёных-экспериментаторов NIH всё же начал поиск исполнителей проекта. В конкурсе на создание базы данных участвовали две группы: команда из Национального Фонда Биомедицинских Исследований (NBRF), возглавляемая Маргарет Дайхофф, и группа исследователей под руководством Уолтера Гоада из Лос-Аламосской национальной лаборатории (LANL) в сотрудничестве с частной компанией «Bolt, Beranek and Newman»[2].

Дайхофф создала одну из первых баз данных биологических последовательностей, собирая аминокислотные последовательности белков с 1960-х годов. В серии томов «Атласа белковых последовательностей и структур» опубликованных начиная с 1965 года, Дайхофф была представлена самая крупная в мире коллекция последовательностей белков и нуклеиновых кислот, новейших методов их анализа и вытекающих из них эволюционных соображений[3].Данный атлас стал чрезвычайно популярен как инструмент в работах молекулярных и эволюционных биологов. Дайхофф рассчитывала, что исследователи будут делиться с ней новыми последовательности напрямую, до того, как они будут опубликованы. Однако данная инициатива не нашла должного отклика среди экспериментальных биологов, так как при занесении в Атлас не устанавливались ни авторство, ни приоритет открытия. Дайхофф и её команда были вынуждены продолжить заниматься ручным анализом публикуемой литературы[2].

Другой претендент на заключение контракта с NIH – группа из Лос-Аламоса, где со времён Манхэттенского проекта велись ограниченные биомедицинские исследования. Узнав о решении, принятом в Университете Рокфеллера, Уолтер Гоад был убеждён, что Лос-Аламос является «естественным местом для центра по анализу последовательностей ДНК», главным образом, из-за «уникальных компьютерных мощностей», которыми обладала располагающаяся там национальная лаборатория[4]. Гоад также начал собирать последовательности нуклеиновых кислот, в основном, из других коллекций, принадлежащих Ричарду Грантому во Франции, Курту Стёберу в Германии, Дугласу Брутлагу и Элвину Кабату в США[2].

Выпуски с последовательностями в первые годы существования GenBank в бумажной форме.

Предложения NBRF (Дайхофф) и LANL-BBN (Гоад) по созданию централизованной базы данных были очень похожи, однако они содержали ключевые различия, касающиеся собственности, конфиденциальности и научного приоритета. NBRF предложила собирать последовательности, анализируя опубликованную литературу и приглашая экспериментаторов предоставлять их данные. Такой подход подразумевал такое же отношение к последовательностям, как отношение натуралистов к экземплярам – находящимся в окружающей природе объектам, которые могут быть собраны и использованы. LANL-BBN, напротив, предлагали просить издательства, чтобы включение последовательностей в базу данных было обязательным условием для публикации статьи в журнале. Такая система соответствовала системе мотивации в экспериментальных науках, в которой результаты исследований считаются личным знанием до того, как они будут опубликованы и им будет присвоено авторство. Публикация таким образом является стимулом к тому, чтобы сделать знания общедоступными[2].

В 1980 году Верховный суд США объявил, что «что-либо под солнцем, созданное человеком», включая генетически модифицированные организмы, может быть запатентовано[5]. Данное заявление поставило перед NIH вопрос о том, кто мог бы стать собственником информации в будущей базе данных. Гоад подчеркнул, что он «не собирается отстаивать какие-либо права собственности на какие бы то ни было данные», и отметил, что Дайхофф и ее команда «искали доходы от продаж своей базы данных и препятствовали их перераспределению», не упомянув, что доходы шли только на покрытие расходов, а не для получения прибыли[6].

CD диск с сотым выпуском GenBank.

LANL-BBN имели возможность в дальнейшем повысить открытость своей базы данных, предложив распространять ее через компьютерную сеть ARPANET, находящуюся под управлением Министерством обороны, в то время как NBRF мог предложить только ограниченный онлайн-доступ через телефонные модемы. 30 июня 1982 года NIH заключила контракт с LANL-BBN на создание общедоступной бесплатной базы данных последовательностей нуклеиновых кислот, которая вскоре стала называться GenBank.

Успех GenBank в сборе всех опубликованных последовательностей был обусловлен двумя ключевыми факторами. Во-первых, было организовано плотное сотрудничество с базой данных EMBL, созданной несколькими месяцами ранее в Гейдельберге, и с DDBJ в 1986 году. Каждая база данных была ответственна за отслеживание публикаций в определённых журналах[2].

Во-вторых, базы данных ДНК всё сильнее отставали от растущего взрывными темпами количества известных последовательностей. Решением проблемы стала договорённость с издательствами об электронном включении последовательностей в базу данных как обязательном условии для публикации в журнале.

С тех пор GenBank рос и расширялся, участвуя в таких проектах, как «Геном человека» и проектах по баркодированию ДНК. GenBank стала примером проекта, основанного на принципах «свободного контента», которые приобретают огромное конкурентное преимущество в современном мире[2].

В середине 1980-х биоинформатическая компания Intelligenetics в Стэнфордском Университете управляла проектом GenBank совместно с LANL. Будучи одним из первых общественных биоинформатических проектов в Интернете, в рамках проекта были открыты первые форумы и средства для обмена научными знаниями: BIOSCI/Bionet.

В период с 1989-1992 GenBank был перемещен в новообразованный Национальный Центр Биотехнологической Информации (NCBI)[7].

Рост количества нуклеотидов в GenBank с декабря 1982 года по февраль 2017

Рост количества последовательностей в GenBank с декабря 1982 года по февраль 2017

В третьем выпуске базы данных, вышедшем в декабре 1982 года содержалось 606 нуклеотидных последовательностей, в пересчёте на основания - 680338. Уже к ноябрю 1983 года количество последовательностей увеличилось более чем в 4 раза - до 2427. До 2000 года рост базы данных имел экспоненциальный характер. К 2007 году количество данных удваивалось каждые 18 месяцев.

С апреля 2002 года ведётся статистика по разделу WGS. Скорость его роста опережает основное отделение GenBank. После уменьшения темпов роста в 2010 году, WGS вновь демонстрирует ускоренный рост[8].

На февраль 2013 года GenBank содержал информацию о более чем 228 млрд. пар оснований и почти 200 млн. последовательностях (из более чем 100 000 живых организмов)[9].

В генном банке содержатся также дополнительные наборы данных, механически добавленных, на основе основной коллекции данных секвенирования.

По информации, содержащейся в таблице, можно определить масштаб данных, накопленных в GenBank и сравнить скорости, с которыми в базе данных появлялись новые записи в первые годы после основания базы и в настоящее время[8].

Аннотированный образец GenBank в формате GenBank Flat File имеет следующие разделы[10]:

Заявки на внесение последовательности в одну из трёх баз (GenBank, ENA или DDBJ) отправляются либо отдельными авторами, либо центрами секвенирования в основном в электронной форме через программы BankIt или Sequin. Синхронизация данных между базами происходит ежедневно. Заявки тщательно проверяются на наличие фрагментов используемых векторов (используется система VecScreen), правильной трансляции кодирующей области, правильной таксономии и правильных библиографических ссылок. Черновик записи в GenBank отправляется обратно автору для проверки и последних правок перед публикацией в базе, которая может быть отложена до указанного момента по просьбе автора. После публикации (обычно в течение 2 дней после подачи заявки) запись получает идентификатор, по которому может быть извлечена посредством Entrez или по FTP. В среднем, за день идентификаторы получают приблизительно 3500 последовательностей. Наличие последовательности в публичном доступе GenBank является обязательным требованием к публикации во многих журналах[12].

GenBank предлагает специальные пакеты программ, облегчающие подачу заявок[12]:

• BankIt – веб-интерфейс NCBI, через который принимается около трети заявок. Предоставляет заявителю специальную форму, заполнение которой позволяет правильно описать последовательность без необходимости изучать правила форматирования и нормативную лексику.
• Sequin – автономный программный инструмент, разработанный NCBI для отправки и обновления записей в базе данных последовательности GenBank. Может обрабатывать записи различной степени сложности,однако один файл Sequin должен содержать менее 10000 последовательностей для максимальной производительности. Более крупные записи должны быть сделаны с помощью tbl2asn.
• tbl2asn – инструмент командной строки для преобразования таблицы с аннотацией, полученной при помощи аннотационного пайплайна, в запись, подходящую для предоставления в GenBank.
• Submission Portal – веб-сервис, предоставляющий интерфейс, который принимает данные WGS в формате FASTA с использованием набора онлайн-форм.
• BarSTool – онлайн-инструмент, позволяющий подавать заявки о включении в базу последовательностей для баркодинга.

В настоящий момент база GenBank, помимо последовательностей отдельных генов, содержит много данных, полученных с помощью современных методов секвенирования ДНК и автоматического аннотирования последовательностей. Существует несколько разделов GenBank, посвящённых данным высокопроизводительного секвенирования[11].

• Genomes – специальный раздел для хранения полных геномов. Созданы руководства по аннотации полных геномов прокариот и эукариот.
• WGS (Whole genome shoutgun) – проекты по сборке неполных геномов, хромосом прокариот или эукариот, главным образом, секвенированных методом дробовика. В GenBank аннотация проектов WGS необязательна, однако NCBI располагает специальным пайплайном для аннотации прокариотических геномов. Существует список доступных WGS-проектов. 
• TPA (Third Party Annotation) – представляет из себя базу данных экспериментальных или выведенных из уже имеющихся данных результатов, аннотация которых не произведена автором из первичных данных, а определена по косвенным. Записи TPA делятся, соответственно, на две категории:
  • experimental – аннотация последовательностей подтверждена экспериментальным доказательством в «мокрой» лаборатории.
  • inferential – аннотация последовательностей сделана путём умозаключения из доступной информации. При этом непосредственно молекула нуклеиновой кислоты или её продукт(ы) не являлись предметами прямых экспериментов.
• TSA (Transcriptome Shotgun Assembly sequences) –  последовательности транскриптомов, полученные путём секвенирования методом дробовика. Данный раздел содержит данные, собранные из последовательностей, размещённых в NCBI Trace Archieve, Sequence Read Archive и разделe GenBank EST. Отдел TSA представляет собой один из самых быстрорастущих разделов GenBank.
• ENV (Environmental sample sequences) – последовательности образцов из окружающей среды, конкретный источник которых неизвестен. Многие из них получены путём анализа метагеномов. Подаздел «Метагеномы» включает в себя группы последовательностей, полученных при секвенировании ДНК, взятой из какого-либо места окружающей среды с определёнными условиями. Такой подход позволяет найти организмы, лабораторная культура которых не получена. Также он исключительно важен для понимания генетического разнообразия, структуры популяций, экологической роли таких организмов. ENV последовательности, как правило, предоставлены данными секвенирования полного метагенома методом дробовика или исследований последовательностей на основе таргетных генов, таких как 16S рРНК. NCBI продолжает поддерживать поиск BLAST метагеномных последовательностей ENV, но последовательности в рамках WGS проектов теперь являются частью базы данных WGS BLAST.
• EST (Expressed sequence tags) – основной источник данных для исследований, посвящённым изучению экспрессии генов и аннотированию последовательностей. Раздел содержит более 40 млрд. пар оснований – является крупнейшим по этому параметру после WGS. 
• HTG (High-throughput genomic) – содержит масштабные геномные записи незавершённых, которые в перспективе будут окончены. Записям в данном разделе присваивается номер фазы, которой соответствует их текущее качество. При достижении третьей фазы – полного завершения – запись переносится в раздел соответствующего организма.
• GSS – содержит записи чернового качества, которые, могут включать в себя 5’ и 3’ нетранслируемые области (UTR), части кодирующих областей и интроны. По мере обретения высокого качества записи перемещаются в раздел соответствующего организма.
• CON (Contig records for assemblies of smaller records) – содержит записи, представляющие собой очень длинные последовательности, такие как эукариотические хромосомы, чьи полные последовательности не известны, но которые включают несколько контигов с неохарактеризованными гэпами между ними. CON скорее содержит не список последовательностей сам по себе, а инструкцию по сборке, включающую несколько последовательностей-компонентов.

• Библиотека генов
• NCBI - Национальный центр биотехнологической информации США

• Официальный веб-сайт БД GenBank
• FTP-сервер с базой данных