Жёлтый флуоресцентный белок

Жёлтый флуоресцентный белок (англ. Yellow Fluorescent Protein) — генетическая мутантная форма зелёного флуоресцентного белка (GFP), выделенного из медузы эквореи Aequorea victoria. Характеризуется максимумом поглощения при 514 нм и максимумом флуоресценции при 527 нм. Широко используется в качестве флуоресцентной метки в клеточной и молекулярной биологии для изучения экспрессии клеточных белков. Кроме него разработана серия других мутантных форм GFP, таких как синий, циановый и др[1].

Жёлтый флуоресцентный белок из коралла Zoanthus.

Применение для FRET

Спектр поглощения YFP довольно сильно пересекается со спектром флуоресценции CFP (англ. Cyan Fluorescent Protein), поэтому эти два флюорофора используются для создания биосенсоров, в основе работы которых лежит явление Фёрстеровского переноса энергии (FRET). Такие сенсоры используются для выявления определённых событий, происходящих в живых клетках. В частности, таким образом можно определять активность ферментов.

Как правило, молекула такого сенсора включает в себя 4 домена [2]:

  1. белок, являющийся носителем сенсора (это может быть практически любой белок);
  2. флюорофор CFP;
  3. домен, меняющий свою структуру в ответ на определенное воздействие (например, фосфорилирование);
  4. флюорофор YFP.

При облучении такого сенсора лазером с длиной волны, возбуждающей только CFP (например, 440 нм — почти не возбуждает YFP, но сильно возбуждает CFP), можно наблюдать флуоресценцию обоих флюорофоров. После соответствующего воздействия на домен 3 происходит изменение структуры сенсора, в результате чего флюорофор YFP отдаляется от CFP и эффективность Фёрстеровского переноса падает (в зависимости от того, на какое расстояние флюорофоры были отдалены друг от друга). В результате интенсивность флуоресценции CFP возрастает, а YFP — падает. Таким образом, по отношению флуоресценции YFP к флуоресценции CFP можно количественно оценить изменение конформации биосенсора.

Примечания
  1. Uemura, T.; Kim, H.; Saito, C.; Ebine, K.; Ueda, T.; Schulze-Lefert, P.; Nakano, A. Qa-SNAREs localized to the trans-Golgi network regulate multiple transport pathways and extracellular disease resistance in plants (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 2012. — Vol. 109, no. 5. — P. 1784—1789. — doi:10.1073/pnas.1115146109. — PMID 22307646.
  2. Access : Midzone activation of aurora B in anaphase produces an intracellular phosphorylation gradient : Nature

См.также

Библиография
  • Miyawaki A., Llopis J., Heim R., et al. Fluorescent indicators for Ca2+ based on green fluorescent proteins and calmodulin (англ.) // Nature : journal. — 1997. — August (vol. 388, no. 6645). — P. 882—887. — doi:10.1038/42264. — PMID 9278050.

Ссылки
This article is issued from Wikipedia. The text is licensed under Creative Commons - Attribution - Sharealike. Additional terms may apply for the media files.