Экстракция смесью фенол-хлороформ

Экстракцию смесью фенол–хлороформ используют в молекулярной биологии для выделения нуклеиновых кислот и удаления белков и липидов.[1]

Процесс

К водным образцам, лизатам клеток, гомогенатам тканей, добавляют равный объем смеси фенол:хлороформ. Смесь фенола и хлороформа не смешивается с водой, образец центрифугируют для лучшего разделения двух фаз. В результате менее плотная водная фаза находится сверху от органической (фенол:хлороформ). Белки и гидрофобные липиды остаются в нижней органической фазе, а нуклеиновые кислоты (а также соли, сахара и т. д.) в верхней водной фазе. Верхнюю водную фазу отбирают пипеткой, стараясь не внести органическую фазу или интерфазу. Эту процедуру часто выполняют несколько раз, чтобы увеличить чистоту ДНК.[2]

Если смесь имеет кислую среду, ДНК будет попадать в органическую фазу, а РНК оставаться в водной фазе.

См. также

Список литературы
  1. Zumbo, P. Phenol-chloroform Extraction. Weill Cornell Medical College.
  2. Sambrook, Joseph; Russell, David W. Commonly Used Techniques in Molecular Cloning (неопр.) // Molecular Cloning. — 2001. — Т. 3.
This article is issued from Wikipedia. The text is licensed under Creative Commons - Attribution - Sharealike. Additional terms may apply for the media files.