Фиксация (гистология)

Фиксация - обработка образца, предназначенного для микроскопирования, с целью сохранить, насколько это возможно, их структуры в неизменном состоянии[1]. В противном случае под действием собственных ферментов, действия гнилостных организмов и в силу других причин образец становится непригодным для исследования. Применяется в гистологии и микробиологии, патологической анатомии. Наиболее распространены химические методы фиксации; в микробиологии часто применяется фиксация нагреванием.

Фиксация образца предшествует его окраске, за исключением витального окрашивания. В гистологии фиксация является этапом, следующим сразу за получением образца.

Общие требования к фиксаторам
  • Фиксаторы должны работать быстро.
  • Не должны вызывать деформацию тканей или делать их хрупкими.
  • Должны переводить клеточное содержимое в состояние, нерастворимое в воде и других жидкостях, использующихся при дальнейшей обработке препарата.
  • Не должны вызывать затемнение препарата, а, напротив, способствовать его просветлению.
  • Не должны образовывать в клетках артефактов фиксации.
  • Не должны препятствовать окраске препарата выбранным методом. Это особенно актуально при использовании иммуногистохимических методов окраски; к примеру, при использовании обычного формалина антигенные структуры зачастую выявить не удается, в таких случаях рекомендуется использовать забуференный (нейтральный) формалин.

Типы фиксаторов

Универсальных фиксаторов, одинаково пригодных для любых целей, не существует. Выбор фиксирующего раствора основывается на его преимуществах и недостатках для работы с конкретным видом материала и пригодностью для конкретного метода микроскопического исследования.

Формалиновые

Наиболее распространенный тип фиксирующего раствора. Прост, дешев, относительно малоопасен для работающего. Используются водные растворы формальдегида в чистом виде, и в составе смесей с другими веществами, например, с уксусной кислотой. Недостаток формалиновых фиксаторов - излишнее уплотнение тканей[2]. Кроме того, при использовании чистого формалина зачастую возможно выпадение белого осадка (кристаллы муравьиной кислоты). Поэтому чаще используют "забуференный" нейтральный формалин.

Спиртовые

Чистый этиловый спирт используют в редких случаях, так как он может вызывать сморщивание материала.

  • Смесь Шаффера — составляется из 2 частей 80% этилового спирта и 1 части формалина. Продолжительность фиксации 1 — 2 дня.
  • Смесь Карнуа — из 6 частей абсолютного этилового спирта, 3 частей хлороформа и 1 части уксусной кислоты. Готовится непосредственно перед употреблением. Продолжительность фиксации 1/2 — 3 часа. Смесь пригодна для фиксации объектов, имеющих плотные оболочки (насекомые, круглые черви).
  • Жидкость Дитриха - смесь этилового спирта, формалина, уксусной кислоты и воды. Продолжительность фиксации 8 - 24 часа. Пригодна для членистоногих[3].

На основе пикриновой кислоты

Объекты, зафиксированные смесями на основе пикриновой кислоты, неустойчивы в воде, поэтому после фиксации объект переносят в 70% спирт. После фиксации объект приобретает жёлтую окраску, что обычно не мешает работе.

  • Смесь пикриновой и уксусной кислот. Насыщенный раствор пикриновой кислоты в 10% уксусной. Пригодна для мелких и нежных объектов.
  • Смесь Буэна. 15 частей насыщенного водного раствора пикриновой кислоты, 5 частей формалина, 1 часть уксусной кислоты. Продолжительность фиксации 2 часа. Затем объекты могут длительное время не портясь сохраняться непосредственно в растворе фиксатора[3].

Сулемовые

Фиксирующие смеси на основе сулемы работают медленно. Применяются в гистологии. Хорошие ядерные фиксаторы [4].

Осмиевая кислота

Фиксаторы на основе осмиевой кислоты мало изменяют структуру тканей и клеток. Хорошие ядерные фиксаторы. Окрашивают жиры в тёмный цвет [5]. В электронной микроскопии применяется в качестве контрастного вещества. Чрезвычайная ядовитость и высокая цена ограничивают применение осмиевых фиксаторов.

Сноски
  1. Роскин, 1946, с. 81.
  2. Роскин, 1946, с. 88-89.
  3. Роскин, 1946, с. 91.
  4. Роскин, 1946, с. 93.
  5. Роскин, 1946, с. 95.

Литература
  • Роскин Г. И. Микроскопическая техника. — М.: Государственное издательство «Советская Наука», 1946.
This article is issued from Wikipedia. The text is licensed under Creative Commons - Attribution - Sharealike. Additional terms may apply for the media files.