Звёздная активность

Звёздная активность — явление снижения или изменения специфичности эндонуклеаз рестрикции, ведущее к неизбирательному разрезанию (рестрикции) ДНК при осуществлении реакции in vitro. Звёздная активность возникает в условиях отличных от оптимума для данного фермента. В результате звёздной активности происходит рестрикция в неканонических сайтах, иногда происходит полная потеря специфичности.

Причинами звёздной активности могут быть:

• низкая ионная сила буферного раствора,
• высокий рН,
• высокая концентрация глицерина (> 5% v/v),
• присутствие диметилсульфоксида (ДМСО),
• наличие Mg²⁺ (в случае эндонуклеазы HindIII) и др.[1]

Высокая концентрация глицерина имеет особенно важное значение в лабораторной практике, поскольку коммерчески доступные эндонуклеазы рестрикции обычно поставляются в буфере, содержащем значительное количество глицерина (50% v/v). Поэтому недостаточное разбавление раствора фермента может привести к звездной активности.