X-gal

5-бромо-4-хлоро-3-индоил-бета-D-галактопиранозид
5-бромо-4-хлоро-3-индоил-бета-D-галактопиранозид
Общие
Систематическое; наименование	5-бромо-4-хлоро-3-индоил-бета-D-галактопиранозид
Хим. формула	C14H15BrClNO6
Физические свойства
Молярная масса	408,629 г/моль
Классификация
Рег. номер CAS	7240-90-6
PubChem	65181
Рег. номер EINECS	230-640-8
SMILES	C1=CC(=C(C2=C1NC=C2O[C@H]3[C@@H]([C@H]([C@H]([C@H](O3)CO)O)O)O)Cl)Br
InChI	InChI=1S/C14H15BrClNO6/c15-5-1-2-6-9(10(5)16)7(3-17-6)22-14-13(21)12(20)11(19)8(4-18)23-14/h1-3,8,11-14,17-21H,4H2/t8-,11+,12+,13-,14-/m1/s1 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N
ChEBI	75055
ChemSpider	58680
	Приведены данные для стандартных условий (25 °C, 100 кПа), если не указано иное.

X-gal (также BCIG от англ. bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside) — органическое соединение, состоящее из галактозы, соединенной с индолом. Очень широко используется в качестве субстрата для бета-галактозидаз в генетической инженерии и молекулярной биологии.

Применение

Клонирование

X-gal используют при клонировании генов для определения экспрессии в клетке гена фермента β-галактозидазы, закодированного в гене lacZ.

X-gal расщепляется β-галактозидазами, при этом образуется галактоза и 5-бромо-4-хлоро-3-гидроксииндол. Последний окисляется в 5,5'-дибромо-4,4'-дихлоро-индиго, нерастворимый окрашенный продукт. В чашку Петри или культуральный флакон вносят X-gal совместно с индуктором β-галактозидаз, например, IPTG.

X-gal позволяет визуально определить, какие из колоний E. coli трансформированы нужным вектором. В норме в клетках E. coli фермент, закодированный геном lacZ синтезируется под действием индуктора IPTG, а синее окрашивание теряется у клеток, содержащих генно-инженерную конструкцию, в которой ген lacZ нарушен в результате генетической вставки.

Репортер

Ген lacZ может быть использован в качестве репортерного, при выращивания бактерии или дрожжей на среде, содержащей X-gal. В случае, когда промотор гена-мишени связан с кодирующей частью гена галактозидазы, связывание белка-активатора с промотором, приводит к образованию окрашенного продукта расщепления X-gal.[1]

Исследование воды

X-Gal используют для определения E. coli и родственных бактерий в образцах воды.

Примечания

Joung J., Ramm E., Pabo C. A bacterial two-hybrid selection system for studying protein-DNA and protein-protein interactions (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 2000. — Vol. 97, no. 13. — P. 7382—7387. — doi:10.1073/pnas.110149297. — PMID 10852947.

This article is issued from Wikipedia. The text is licensed under Creative Commons - Attribution - Sharealike. Additional terms may apply for the media files.

[joung-1] Joung J., Ramm E., Pabo C. A bacterial two-hybrid selection system for studying protein-DNA and protein-protein interactions (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 2000. — Vol. 97, no. 13. — P. 7382—7387. — doi:10.1073/pnas.110149297. — PMID 10852947.