Аллофикоцианин

Аллофикоцианин (от Греческого: ἄλλος (аллос) — «другой», φύκος (фикос) — «водоросль», и κυανός (кианос) — «голубой») — светособирающий белок из семейства фикобилипротеинов, в которое так же входят фикоцианин, фикоэритрин и фикоэритроцианин, и является вспомогательным пигментом для хлорофилла. Все фикобилипротеины растворимы в воде и следовательно не могут быть закреплены на мембране как каротиноиды, а вместо этого формируют закреплённые на мембране кластеры, называемые фикобилисомами. Аллофикоцианин поглощает и излучает красный свет (650 и 660 нм соответственно), и легко обнаруживается у цианобактерий и красных водорослях. Способность фикобилинов испускать свет используется в наборах иммунологического анализа. Аллофикоцианин довольно часто используют в проточной цитометрии, при счёте и сортировке клеток, и микроскопии. Для этого в него внедряют химическую сшивку.

Структура аллоцианина из цианобактерии Gloeobacter violaceus.

Строение

Аллофикоцианин можно выделить из разных видов красных или сине-зелёных водорослей, каждый из которых синтезирует свою, несколько отличающуюся от других форму этой молекулы. Белок состоит из двух типов субъединиц (α и β), каждая несёт по одной хромофорной группе фикоцианобилина. Общую формулу белка можно описать как (αβ)3. Молекулярная масса аллофикоцианина 105 кДа.

Спектральные характеристики
Максимум поглощения652 нм
Добавочный максимум поглощения625 нм
Максимум излучения657.5 нм
Сдвиг Стокса5.5 нм
Коэффициент экстинкции2.4 x 105 M−1см−1
Квантовый выход0.68
Яркость1.6 x 105 M−1см−1

Сшитый аллофикоцианин

Как упоминалось выше, чтобы использовать аллофикоцианин в иммунологическом анализе, его необходимо химически сшить, чтобы предотратить диссоциацию его субъединиц, что довольно часто происходит в стандартных физиологических буферах.[1] Традиционным методом для этого служит смешивание с 1-этил-3,3-диметиламинопропилом — мощным сшивочным агентом. Затем его обрабатывают восьми молярным раствором мочевины, а затем дают ренатурировать, но уже в физиологическом буфере. Такая процедура позволяет избавится от несшившихся субъединиц.[2] Существуют альтернативные способы, использование которых позволяет сохранить нативную структуру тримера и получить более яркий конечный продукт[3].

Примечания
  1. George C. Papageorgiou, Thoula Lagoyanni. Effects of chaotropic electrolytes on the structure and electronic excitation coupling of glutaraldehyde- and diimido ester-cross-linked phycobilisomes. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) — Bioenergetics Volume 724, Issue 3, 30 September 1983, Pages 323—332
  2. Yeh SW, Ong LJ, Clark JH, Glazer AN. Fluorescence properties of allophycocyanin and a crosslinked allophycocyanin trimer. Cytometry. 1987 Jan; 8(1):91-5.
  3. United States Patent 7256050; High fluorescent intensity cross-linked allophycocyanin. Assigned to Columbia Biosciences Corp.
This article is issued from Wikipedia. The text is licensed under Creative Commons - Attribution - Sharealike. Additional terms may apply for the media files.